产品货号：
HR0595
中文名称：
内质网染色试剂盒(蓝色荧光)
英文名称：
产品规格：
125T|250T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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内质网染色试剂盒是利用E系列探针进行内质网特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的E01内质网染色探针为蓝色荧光标记的内质网探针，具有373/430nm的最大激发/发射波长。
E系列探针是一种细胞渗透型的对活细胞中的内质网体进行选择性染色的一类新型荧光染料，该系列探针可以选择性标记内质网。只需简单孵育细胞，即可穿过细胞膜并直接聚集在活性内质网上。可有效标记活细胞。一旦内质网被染色后，还能根据后续实验的需求进行固定(醛类固定剂如甲醛)和透化(醛类去污剂如Triton X-100)，探针依然维持在细胞内。
E系列内质网探针具有多种颜色可以选择，可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的红色荧光探针，我公司还可以提供绿色、红色等颜色的染色试剂盒。
储存条件：染料-20℃避光保存；避免反复冻融；稀释液2-8℃保存。
有效期：6个月
※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● HBSS ●离心机●荧光显微镜/激光共聚焦显微镜
使用注意事项：
● E01染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
●标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
● 最好使用HBSS缓冲液(含Ca2+、Mg2+ Hank’s平衡盐溶液)稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。
● E01染料具有环境敏感性，工作液条件发生改变E01 会随之出现极性增强、最大荧光波长偏移到更高波长处、量子产量下降等现象。
●染色后立即进行分析。
● 操作过程中需要尽量避光。
使用方法：
1．染色工作液配制：
根据样本数量，用染料稀释液将E01荧光染料10倍稀释，再用HBSS缓冲液或者相应的培养基50-500倍稀释(对于后续需要做固定或透化的样本，20-100倍稀释)，配制成染色工作液。
【注】:
● 也可以直接用HBSS或相应的培养基等缓冲液稀释E01染料母液至所需工作浓度。
● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。
● 开始实验前，使用HBSS或培养基缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。工作浓度为根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，一般染色终浓度500-5000倍稀释。
● 为了降低过度加载染料导致的潜在背景和内质网毒性，在不影响实验结果的前提下应尽可能低浓度染色。另外，浓度过高也可能造成非特异性染色，对其他细胞结构进行染色。
● 工作液现配现用。
● 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
2．细胞染色
2.1对于贴壁细胞
1)培养皿/培养板准备细胞样本。
2)待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，用HBSS缓冲液洗涤细胞，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育15分钟～40分钟(具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化)。
【注】:
● 也可以将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
3)利用新鲜培养基替换上述染色液。
【注】:
● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
4)荧光显微镜(含合适滤片)或激光共聚焦显微镜下观察。最大激发/发射波长为373/430nm。或者进行后续的固定和透化步骤。
2.2对于悬浮细胞
1)离心，吸除上清。
2)利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育15分钟～40分钟(具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化)。
3)离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
4)置于荧光镜下观察。或激光共聚焦显微镜检测。最大激发/发射波长为373/430nm。或者进行后续的固定和透化步骤。
【注】:
●对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经细胞粘合剂处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。
● 如果需要盖玻片上固定化的细胞，那么可在铺片前可以先用多聚赖氨酸(poly-D-lysine)包被载玻片或盖玻片。
● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
3．固定和透化：
1)染色结束后，利用培养液或缓冲液清洗细胞；
2)小心吸走清洗液。换用新鲜配制且预热的含2-4%甲醛的缓冲液或培养液进行细胞固定。
【注】:
● 已染色细胞用醛固定后，仅部分E01探针留在细胞内，荧光信号会有部分衰减。
3)清洗细胞：吸除固定液，用适当缓冲液冲洗细胞数次。
4)细胞透化(可选)：
ICC等实验需要细胞要做透化，可将已固定的细胞直接加入含有去污剂如Triton X-100的缓冲液中孵育。透化结束后，用缓冲液清洗细胞即可进行后续ICC 实验。
一般用含0.2% Triton X-100的PBS 孵育细胞10分钟可以达到良好的透化效果。
透化后可以进行后续的其他染色实验。还可利用预冷的丙酮透化5分钟，之后用PBS清洗细胞。经验证，即使后继没有进一步的抗体标记，丙酮透化处理也可降低背景信号。
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E系列探针是一种细胞渗透型的对活细胞中的内质网体进行选择性染色的一类新型荧光染料，该系列探针可以选择性标记内质网。只需简单孵育细胞，即可穿过细胞膜并直接聚集在活性内质网上。可有效标记活细胞。一旦内质网被染色后，还能根据后续实验的需求进行固定(醛类固定剂如甲醛)和透化(醛类去污剂如Triton X-100)，探针依然维持在细胞内。
E系列内质网探针具有多种颜色可以选择，可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的红色荧光探针，我公司还可以提供绿色、红色等颜色的染色试剂盒。
储存条件：染料-20℃避光保存；避免反复冻融；稀释液2-8℃保存。
有效期：6个月
※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● HBSS ●离心机●荧光显微镜/激光共聚焦显微镜
使用注意事项：
● E01染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
●标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
● 最好使用HBSS缓冲液(含Ca2+、Mg2+ Hank’s平衡盐溶液)稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。
● E01染料具有环境敏感性，工作液条件发生改变E01 会随之出现极性增强、最大荧光波长偏移到更高波长处、量子产量下降等现象。
●染色后立即进行分析。
● 操作过程中需要尽量避光。
使用方法：
1．染色工作液配制：
根据样本数量，用染料稀释液将E01荧光染料10倍稀释，再用HBSS缓冲液或者相应的培养基50-500倍稀释(对于后续需要做固定或透化的样本，20-100倍稀释)，配制成染色工作液。
【注】:
● 也可以直接用HBSS或相应的培养基等缓冲液稀释E01染料母液至所需工作浓度。
● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。
● 开始实验前，使用HBSS或培养基缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。工作浓度为根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，一般染色终浓度500-5000倍稀释。
● 为了降低过度加载染料导致的潜在背景和内质网毒性，在不影响实验结果的前提下应尽可能低浓度染色。另外，浓度过高也可能造成非特异性染色，对其他细胞结构进行染色。
● 工作液现配现用。
● 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
2．细胞染色
2.1对于贴壁细胞
1)培养皿/培养板准备细胞样本。
2)待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，用HBSS缓冲液洗涤细胞，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育15分钟～40分钟(具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化)。
【注】:
● 也可以将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
3)利用新鲜培养基替换上述染色液。
【注】:
● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
4)荧光显微镜(含合适滤片)或激光共聚焦显微镜下观察。最大激发/发射波长为373/430nm。或者进行后续的固定和透化步骤。
2.2对于悬浮细胞
1)离心，吸除上清。
2)利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育15分钟～40分钟(具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化)。
3)离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
4)置于荧光镜下观察。或激光共聚焦显微镜检测。最大激发/发射波长为373/430nm。或者进行后续的固定和透化步骤。
【注】:
●对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经细胞粘合剂处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。
● 如果需要盖玻片上固定化的细胞，那么可在铺片前可以先用多聚赖氨酸(poly-D-lysine)包被载玻片或盖玻片。
● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
3．固定和透化：
1)染色结束后，利用培养液或缓冲液清洗细胞；
2)小心吸走清洗液。换用新鲜配制且预热的含2-4%甲醛的缓冲液或培养液进行细胞固定。
【注】:
● 已染色细胞用醛固定后，仅部分E01探针留在细胞内，荧光信号会有部分衰减。
3)清洗细胞：吸除固定液，用适当缓冲液冲洗细胞数次。
4)细胞透化(可选)：
ICC等实验需要细胞要做透化，可将已固定的细胞直接加入含有去污剂如Triton X-100的缓冲液中孵育。透化结束后，用缓冲液清洗细胞即可进行后续ICC 实验。
一般用含0.2% Triton X-100的PBS 孵育细胞10分钟可以达到良好的透化效果。
透化后可以进行后续的其他染色实验。还可利用预冷的丙酮透化5分钟，之后用PBS清洗细胞。经验证，即使后继没有进一步的抗体标记，丙酮透化处理也可降低背景信号。
相关搜索：内质网染色试剂盒(蓝色荧光)